在心血管研究中，人們常使用急性分離的心肌細(xì)胞做膜片鉗或激光共聚焦實(shí)驗(yàn)，做上述實(shí)驗(yàn)時(shí)，須要細(xì)胞的數(shù)目不多，但要求細(xì)胞“耐鈣”（不跳動(dòng)）。怎樣在分離時(shí)每次都能得到“耐鈣”的心肌細(xì)胞，已成為人們的關(guān)注熱點(diǎn)。
實(shí)際上細(xì)胞膜片，影響心肌細(xì)胞分離療效的誘因好多，比如:(1)摘取腎臟到主動(dòng)脈導(dǎo)尿迅速的時(shí)間，通常要求在2min以內(nèi)，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可發(fā)生心肌缺血-再灌注損傷；（2）主動(dòng)脈存留過(guò)短常造成導(dǎo)尿穿過(guò)主動(dòng)脈瓣而插入心室，過(guò)長(zhǎng)會(huì)造成灌流液經(jīng)主動(dòng)脈分支流出，均可影響灌流療效；（3）Langendoff裝置事先要排盡氣泡，否則氣栓可引起心肌損傷；（4）注意調(diào)節(jié)灌流液的酸堿度，偏酸偏堿均可導(dǎo)致心肌損傷等。
一般采用離體灌流裝置分離心肌細(xì)胞。首先用正常含鈣液預(yù)灌注10-20min（沖殘血,還氧債）→無(wú)鈣液灌注5min（解除心肌細(xì)胞間的橋粒和聯(lián)接）→Ⅱ型或Ⅰ型膠原酶循環(huán)灌注（解離細(xì)胞間結(jié)締組織）。因?yàn)榉Q取酶量、生產(chǎn)公司和批號(hào)不同還會(huì)影響消化的時(shí)間和療效，所以各個(gè)研究小組報(bào)導(dǎo)膠原酶的消化時(shí)間也各不相同。通常當(dāng)灌流液出現(xiàn)拉絲,腎臟坐果酥脆、顏色發(fā)白時(shí)停止膠原酶消化。
上述分離方式和注意事項(xiàng)可參見(jiàn)：
（1）張紫冠,李衛(wèi)華,黃崢嶸等。SD小鼠心肌細(xì)胞分離方式探求。心血管復(fù)健醫(yī)學(xué)刊物2010，19（3）：274-278
（2）廖華，糜濤，涂志業(yè)等。成年家兔心肌細(xì)胞分離方式的改良。中國(guó)組織工程研究與臨床復(fù)健第13卷第33期2009；13（33）：6536-6539
（上述2篇論文可以從我的文獻(xiàn)中“參考文獻(xiàn)”類別中免費(fèi)全文下載）
傳統(tǒng)的心肌細(xì)胞分離方式常采用固定的消化時(shí)間，結(jié)果往往是“有時(shí)歡樂(lè)有時(shí)愁”。臺(tái)灣學(xué)院的李貴榮院長(zhǎng)倡導(dǎo)的“分段消化法”是分離心肌細(xì)胞“屢試不爽”的好方式。
前幾天，翻閱往日的相片時(shí)，無(wú)意中聽(tīng)到了我們和李貴榮院士的一些相片，它喚起了我們一段美好的追憶：
1989-1990,我獲得了世界衛(wèi)生組織（WHO）的獎(jiǎng)學(xué)金，在全蘇腎臟病研究中心（俄羅斯）學(xué)習(xí)膜片鉗技術(shù)。楊寶峰教授陸續(xù)在臺(tái)灣筑波Eisai研究所（1991-1992）和美國(guó)舊金山腎臟病研究所（1995-1996）讀博士后。李玉榮院士也曾在全蘇腎病研究所（1991-1992）做訪問(wèn)學(xué)者。為了在西安醫(yī)科學(xué)院舉辦膜片鉗研究，當(dāng)時(shí)均為教研室副部長(zhǎng)和副院長(zhǎng)的我們兩人，即楊寶峰（毒理）、李玉榮（生理）徐長(zhǎng)慶（病理生理），回國(guó)后自發(fā)組合成聯(lián)合攻關(guān)小組。共同的理想，共同的信念，共同的戰(zhàn)斗，使我們成為了休戚與共的好同事，堪稱哈醫(yī)大鐵三角。
聯(lián)合攻關(guān)小組（楊寶峰，李玉榮，徐長(zhǎng)慶）在研討膜片鉗實(shí)驗(yàn)
1997.6.20–23，為了促進(jìn)膜片鉗技術(shù)在全省的推廣，哈醫(yī)大舉行了《膜片鉗理論和實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)班》。聘請(qǐng)當(dāng)時(shí)美國(guó)舊金山腎臟研究所的李貴榮研究員為主講人，楊寶峰院士、李玉榮院士和我作為副講人，并向?qū)W員領(lǐng)取了由我們兩人編撰學(xué)習(xí)班課件。
學(xué)習(xí)班全體合照
大會(huì)結(jié)束時(shí)，我們還坐船游玩了美麗的松花江，并在蘆葦叢中合照留影。
哈爾濱浦口合照（楊寶峰，李貴榮，李玉榮，徐長(zhǎng)慶）
在此次大會(huì)上，李貴榮院長(zhǎng)向我們介紹了分離心肌細(xì)胞的“分段消化法”。
所謂的“分段消化法”和傳統(tǒng)的心肌細(xì)胞分離方式?jīng)]有本質(zhì)的不同，只是同一個(gè)腎臟施行膠原酶的消化時(shí)間不同。首先以灌流液拉絲,、心臟酥脆、顏色發(fā)白確定一個(gè)平均消化時(shí)間（比如，30min）后，每次施行心肌細(xì)胞分離時(shí)，在這一時(shí)間點(diǎn)前后幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)（比如20、25、30、35、40等）分別剪去少許心肌（通常由心底漸漸移至心尖），倒入KB液中吹打，鏡下觀察。在這種時(shí)間點(diǎn)中，總會(huì)有1個(gè)或多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的消化時(shí)間合適細(xì)胞膜片，確保每次都能獲得滿意的分離療效，堪稱“事半功倍”或“以一當(dāng)十”。
從此次學(xué)術(shù)大會(huì)后，我們成為了好同學(xué)，多次相互訪問(wèn)。
訪問(wèn)臺(tái)灣學(xué)院時(shí)合照
海峽兩岸心血管研討會(huì)合照（云南）
“分段消化”分離心肌細(xì)胞的方式在本課題組的實(shí)踐中時(shí)常奏效，因而，我樂(lè)意將它奉獻(xiàn)給舉辦心肌細(xì)胞分離的同學(xué)，希望也能助你們一臂之力。
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