(1) 暗視野顯微鏡
(2)體視顯微鏡
(3)熒光顯微鏡
(4) 相差顯微鏡
(5)倒置顯微鏡
(6) 偏光顯微鏡
(1) 暗視野顯微鏡
暗視野顯微鏡不具備觀察物體內(nèi)部精細(xì)結(jié)構(gòu)的功能，但可以區(qū)分0.004μm以上顆粒的存在和運(yùn)動(dòng)。 因此，常被用來(lái)觀察活細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)顆粒的運(yùn)動(dòng)。
暗視野顯微鏡的基本原理是廷德?tīng)栃?yīng)。 當(dāng)一束光穿過(guò)暗室時(shí)，從垂直于入射光的方向可以在空氣中觀察到一條明亮的灰塵“路徑”。 這種現(xiàn)象就是丁達(dá)爾效應(yīng)。
普通光學(xué)顯微鏡上暗場(chǎng)顯微鏡更換為暗場(chǎng)聚光鏡后，由于聚光鏡內(nèi)部拋物面結(jié)構(gòu)的阻擋，照射到被檢物體表面的光線無(wú)法直接進(jìn)入物鏡鏡頭和目鏡。 只有散射光可以通過(guò)，所以視野是黑暗的。 操作者通過(guò)目鏡觀察到的是被檢物體的衍射光圖像（圖1-2）。
使用暗視野顯微鏡的基本方法如下：
1、安裝暗場(chǎng)聚光鏡（或者用一張厚黑紙做遮光罩，放在普通顯微鏡的聚光鏡下即可得到暗場(chǎng)效果）。
2. 使用強(qiáng)光源，通常是顯微鏡燈，以防止直射光進(jìn)入物鏡。
3、在聚光鏡和載玻片之間加入一滴雪松油，防止照明光在聚光鏡上完全反射而不能到達(dá)被檢查物體，造成暗場(chǎng)照明。
4、進(jìn)行調(diào)心，即水平移動(dòng)聚光鏡，使聚光鏡光軸與顯微鏡光軸嚴(yán)格一致。 升降聚光鏡，將聚光鏡的焦點(diǎn)（圖1-2中錐束的頂點(diǎn)）對(duì)準(zhǔn)被檢物體。
5、選擇與聚光鏡對(duì)應(yīng)的物鏡，調(diào)節(jié)焦距，像普通顯微鏡一樣操作。
(2)體視顯微鏡
體視顯微鏡也稱(chēng)為實(shí)體顯微鏡或解剖顯微鏡。 其圖像為正立三維空間圖像，具有立體感強(qiáng)、圖像清晰寬廣、工作距離長(zhǎng)（通常為110毫米）、連續(xù)放大觀看等特點(diǎn)。 在生物學(xué)中偏光顯微鏡補(bǔ)償器的作用，它常用于解剖學(xué)過(guò)程中的實(shí)時(shí)觀察（圖1-3）。
普通光學(xué)顯微鏡的光源是平行光，從而形成二維平面圖像； 而體視顯微鏡則采用雙通道光路，雙目鏡筒內(nèi)的左右光束具有一定的視角（通常為 ），從而形成三維空間的立體圖像。
體視顯微鏡的使用與普通光學(xué)顯微鏡類(lèi)似，但更方便。 兩者之間的主要區(qū)別是：
1、體視顯微鏡檢查的對(duì)象無(wú)需制作成封片膜。
2、體視顯微鏡載物臺(tái)直接固定在鏡座上，配有黑白雙面板或玻璃板。 操作者可根據(jù)顯微鏡的對(duì)象和要求進(jìn)行選擇。
3、體視顯微鏡成像為直立，方便解剖操作。
4、體視顯微鏡只有一個(gè)物鏡，通過(guò)旋轉(zhuǎn)調(diào)節(jié)螺桿可以連續(xù)調(diào)節(jié)其放大倍數(shù)。
(3)熒光顯微鏡
熒光顯微鏡是利用細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)發(fā)出的熒光強(qiáng)度進(jìn)行定性和定量研究的光學(xué)工具。
細(xì)胞中有兩種熒光物質(zhì)。 一類(lèi)受紫外線照射后可直接發(fā)出熒光，如葉綠素。 還有一些物質(zhì)本身不具有這種性質(zhì)，但如果用特定的熒光染料或熒光抗體染色，在受到紫外線照射后就會(huì)發(fā)出熒光。 照射后也可發(fā)出熒光（圖 1-4）。
熒光顯微鏡的原理是利用高光效點(diǎn)光源（如超高壓汞燈）通過(guò)濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長(zhǎng)的光（如紫外光3650λ或紫藍(lán)光4200λ）作為激發(fā)光來(lái)激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)。 各種顏色的熒光發(fā)出后，經(jīng)過(guò)物鏡后面的阻擋（或抑制）濾光片過(guò)濾，最后通過(guò)目鏡的放大倍數(shù)進(jìn)行觀察。
阻擋濾光片有兩個(gè)作用：一是吸收并阻擋激發(fā)光進(jìn)入目鏡，避免干擾熒光，損傷眼睛；二是吸收阻擋激發(fā)光。 另一種是選擇并讓特定的熒光通過(guò)，以顯示特定的熒光顏色。
熒光顯微鏡按光路原理可分為兩種：
1.透射熒光顯微鏡
在較舊的熒光顯微鏡中，激發(fā)光源通過(guò)聚光鏡穿過(guò)樣本材料以激發(fā)熒光。 優(yōu)點(diǎn)是低倍時(shí)熒光較強(qiáng)，缺點(diǎn)是隨著倍率增大熒光減弱。 因此只適合觀察較大的標(biāo)本材料。
2.落射熒光顯微鏡
激發(fā)光從物鏡向下落到樣品表面，即照明聚光鏡和收集熒光的物鏡使用同一物鏡（圖1-5）。
光路中需要添加二向色分光鏡（二向色鏡），與光軸成45°角。 激發(fā)光反射到物鏡中并聚集在樣品上。 樣品產(chǎn)生的熒光被物鏡和蓋子的表面反射。 載玻片表面反射的激發(fā)光同時(shí)進(jìn)入物鏡，返回二向色分光鏡，將激發(fā)光和熒光分離。 然后剩余的激發(fā)光被阻擋濾光片吸收。 如果使用不同的激發(fā)濾光片/雙色分束器/阻擋濾光片組合插片，則可以滿足不同熒光反應(yīng)產(chǎn)物的需求。
這種熒光顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)是視場(chǎng)照明均勻，圖像清晰，放大倍數(shù)越大，熒光越強(qiáng)。
(4) 相差顯微鏡
相差顯微鏡是一種可以將光線通過(guò)物體時(shí)產(chǎn)生的相位差（或光程差）轉(zhuǎn)換為振幅（光強(qiáng)）變化的顯微鏡。 主要用于觀察活細(xì)胞、未染色的組織切片或缺乏對(duì)比度的染色標(biāo)本。
人眼只能識(shí)別可見(jiàn)光的波長(zhǎng)（顏色）和振幅的變化，而不能識(shí)別相位的變化。 大多數(shù)生物標(biāo)本都是高度透明的，光波穿過(guò)它后振幅基本保持不變，只有相位發(fā)生變化。
相差顯微鏡基本上是將透過(guò)標(biāo)本的可見(jiàn)光的光程差轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹?，從而提高各種結(jié)構(gòu)之間的對(duì)比度，使各種結(jié)構(gòu)清晰可見(jiàn)。 光線穿過(guò)標(biāo)本后發(fā)生折射，偏離原來(lái)的光路，并被延遲1/4λ（波長(zhǎng)）。 如果增加或減少1/4λ，則光程差變?yōu)?/2λ，兩束光束合并后發(fā)生干涉。 加強(qiáng)、增加或減少幅度，并增加對(duì)比度（見(jiàn)圖 6）。
從結(jié)構(gòu)上看偏光顯微鏡補(bǔ)償器的作用，相差顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡的區(qū)別是：
1、環(huán)形光闌有一個(gè)環(huán)形開(kāi)口，安裝在光源和聚光鏡之間。 其作用是使通過(guò)聚光鏡的光線形成空心光錐并聚焦在標(biāo)本上。
2、相位板相差顯微鏡在物鏡內(nèi)部增加了一塊涂有氟化鎂的相位板，使直射光或衍射光的相位延遲1/4λ。 相位板上有兩個(gè)區(qū)域，直射光通過(guò)的部分稱(chēng)為“共軛面”，衍射光通過(guò)的部分稱(chēng)為“補(bǔ)償面”。 相位板按其工作作用分為兩種：
(1) A+相位板：使直射光延遲1/4λ。 兩組光波組合后，光波疊加，振幅增大。 標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周?chē)橘|(zhì)更亮，形成亮對(duì)比度（或負(fù)對(duì)比度）。
(2) B+相位板：使衍射光延遲1/4λ。 兩組光線合成后，光波相減，振幅變小，標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周?chē)橘|(zhì)更暗，形成暗對(duì)比度（或正對(duì)比度）。 帶相位板的物鏡稱(chēng)為相襯物鏡，在物鏡外殼上常標(biāo)有“Ph”字樣。
同軸可調(diào)望遠(yuǎn)鏡
相差顯微鏡配有同軸調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡（外殼上標(biāo)有“CT”符號(hào)），用于調(diào)節(jié)環(huán)形光闌，使圖像與相位板的共軛面完全一致，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)直射光和衍射光的特殊處理。 。
使用時(shí)，取下一側(cè)目鏡，插入望遠(yuǎn)鏡調(diào)軸，調(diào)整軸即可調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡的焦距，視野內(nèi)會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)環(huán)，即較亮的環(huán)形光圈環(huán)和較暗的環(huán)形光圈環(huán)。共軛在相位板上。 面環(huán)。 然后轉(zhuǎn)動(dòng)聚光器上環(huán)形膜片的兩個(gè)調(diào)節(jié)螺釘，使兩個(gè)環(huán)完全重疊。 如果明亮的光暈太小或太大，請(qǐng)調(diào)節(jié)聚光鏡的升降旋鈕，使兩個(gè)環(huán)完美匹配。 如果聚光鏡已升到最高點(diǎn)或降到最低點(diǎn)仍無(wú)法校正，則說(shuō)明載玻片太厚，應(yīng)更換。 調(diào)整完畢后，可以拆下同軸調(diào)整望遠(yuǎn)鏡，換上目鏡。
綠色濾光片
用于調(diào)節(jié)光源的波長(zhǎng)。 不同波長(zhǎng)的照明光會(huì)引起相位變化。 為了獲得良好的相襯效果，相襯顯微鏡需要使用波長(zhǎng)范圍較窄的單色光，通常用綠色濾光片進(jìn)行調(diào)節(jié)。
使用相差顯微鏡的步驟如下：
① 根據(jù)被檢樣品的性質(zhì)和要求，選擇合適的相襯物鏡。
② 將載玻片放置在載物臺(tái)上，調(diào)整光軸中心。
③利用望遠(yuǎn)鏡的同軸調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)環(huán)形光闌與相位板上的共軛面環(huán)完全重合，然后更換目鏡。 在觀察過(guò)程中，每次改變物鏡放大倍數(shù)時(shí)，都必須重新調(diào)整環(huán)形光闌以與相位板共軛面的環(huán)相匹配。
④ 加綠色濾光片，按照普通光學(xué)顯微鏡的操作步驟進(jìn)行觀察。
(5)倒置顯微鏡
倒置顯微鏡的結(jié)構(gòu)與普通顯微鏡基本相同，只是交換了物鏡和照明系統(tǒng)的位置。 前者在臺(tái)下，后者在臺(tái)上。 主要用于觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞，需要配備相差物鏡。
(6) 偏光顯微鏡
偏光顯微鏡可用于檢測(cè)雙折射物質(zhì)，如染色體、膠原蛋白、纖維等（圖1-7）
與普通顯微鏡的區(qū)別在于：
① 偏光顯微鏡在光源前面裝有起偏器（偏光鏡），使進(jìn)入顯微鏡的光發(fā)生偏振。
②鏡筒內(nèi)有檢偏器（檢偏器，偏光方向與偏光器垂直的偏光器）。
③ 使用旋轉(zhuǎn)臺(tái)。 當(dāng)單個(gè)折射物質(zhì)放置在載物臺(tái)上時(shí)，無(wú)論載物臺(tái)如何旋轉(zhuǎn)，由于兩個(gè)偏光鏡是垂直的，因此在顯微鏡中看不到光。 當(dāng)放置雙折射物質(zhì)時(shí)，光穿過(guò)這種類(lèi)型的材料。 物體被物體偏轉(zhuǎn)，從而使旋轉(zhuǎn)臺(tái)能夠檢測(cè)到此類(lèi)物體。
④ 配備補(bǔ)償器或相位膜；
⑤ 使用專(zhuān)用無(wú)應(yīng)力物鏡。
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